【组织学与胚胎学】第一章 组织学绪论
一、组织学的内容和意义
1、 组织:许多形态相似、功能相关的细胞,与细胞外基质形成的细胞群,称为组织。
※组织一般分为四种,即上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织,统称为基本组织。
2、器官:在胚胎早期由几种不同组织发育分化和有机结合形成,在机体内执行比组织更高一级的特定生理功能。
3、系统:许多结构相似、功能相关的器官联合在一起构成系统。
二、常用组织学技术
(一)光学显微镜技术:分辨率为0.2μm
1、光镜观察的石蜡包埋组织切片通过取材、固定、石蜡包埋、切片、脱蜡、染色、透明等步骤制成。
2、组织学最常用的是苏木精和伊红染色法,简称HE染色法。
(1)苏木精是碱性染料,能将细胞核染成蓝紫色;伊红是酸性染料,能将细胞质染成红色。
(2)嗜碱性:对碱性染料亲和力强者,称嗜碱性
(3)嗜酸性:对酸性染料亲和力强者,称嗜酸性
(4)中性:与酸性和碱性染料的亲和力均不强者,称中性
3、利用物理吸附作用的染色法:
(1)亲银性:银染法中有些组织结构可直接使硝酸银还原而显示,称此为亲银性
(2)嗜银性:银染法中有些组织结构无直接还原作用,需要加入还原剂方能显色,则称为嗜银性。
(3)异染性:组织细胞成分染色后呈颜色与将其染色的染料颜色不同,称为异染性。(如:结缔组织和软骨基质中的氨基聚糖,当用甲苯胺蓝等碱性染料染色后呈紫红色)
(二)电镜技术
1、透射电镜术(TEM):分辨率为0.2nm
(1)需要制备超薄切片(50~80nm)
(2)取材要求:尽量新鲜,以保存细胞正常的超微结构
(3)组织块(1mm³以内)用戊二醛和锇酸两次固定,由醋酸铀和柠檬酸铅染色
(4)高电子密度与低电子密度:
当电子束投射到密度大、吸附重金属多的结构(如溶酶体)时,电子被散射得多,因此,射落到荧光屏上的电子少而呈暗像,电镜照片上呈黑或深灰色,习惯称该结构为高电子密度,反之呈浅灰色,称低电子密度。
2、 扫描电镜术(SEM):分辨率为0.2nm
取样要求同透射电镜,组织块用戊二醛和锇酸固定后,经脱水、干燥,再于其表面喷镀薄层金膜。
(三)组织化学术
1、一般组织化学术
(1)基本原理:在切片上加某种试剂,与组织中的待检物质发生化学反应,其最终产物为有色沉淀物或重金属沉淀,以便用显微镜观察。
(2)举例:过碘酸希夫反应(PAS反应)显示聚糖和糖蛋白的糖链。
2、免疫组织化学术:根据抗原和抗体特异性结合的原理,检测组织中的肽和蛋白质。
3、原位杂交术/核酸分子杂交组织化学术
(1)基本原理:用带有标记物的已知碱基顺序的核酸探针,与细胞内待测的核酸按碱基配对的原则,进行特异性原位结合,即杂交,然后通过对标记物的显示与检测,而获取待测核酸的有无及相对量。
(2)常用标记物:地高辛、荧光素。